乳糖是兒童生長(zhǎng)發(fā)育的主要營養(yǎng)物質(zhì)之一,對(duì)青少年智力發(fā)育十分重要,特別是新生嬰兒*的,在自然界中只有哺乳類動(dòng)物的奶中含有乳糖,各類植物性食物中是不含乳糖的。一分子乳糖消化可得一分子葡萄糖和一分子半乳糖。半乳糖能促進(jìn)腦苷脂類和黏多糖類的生成,因而對(duì)幼兒智力發(fā)育非常重要。乳制品企業(yè)通常通過測(cè)定牛乳中半乳糖的含量來計(jì)算牛乳中乳糖的含量。
設(shè)備:
ELSD3300蒸發(fā)光散射檢測(cè)器
Agilent 1260 HPLC,C.01.07
試劑及耗材:
流動(dòng)相A:超純水
流動(dòng)相B:色譜純乙腈
色譜柱:Beksich糖柱,4.6*250mm,5um
(貨號(hào):Bek445101)
柱溫箱溫度:
30C
樣品:
牛乳樣品提取物
樣品預(yù)處理:
樣品經(jīng)蛋白沉淀后,0.45um濾膜過濾后取上清液待上樣
進(jìn)樣體積:
20ul
按78%乙腈:22%水等梯度比例進(jìn)行檢測(cè),運(yùn)行時(shí)間為20min
流動(dòng)相流速:
0.9ml/min
樣品檢測(cè):
樣品配置好后置于自動(dòng)進(jìn)樣器中,使用編輯好的方法進(jìn)行自動(dòng)進(jìn)樣分析
ELSD3300蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定牛乳中乳糖含量
結(jié)果見表1。
表 1:乳糖定量檢測(cè),*個(gè)峰為半乳糖
表2:半乳糖和葡萄糖分離度及拖尾因子情況
表 3:半乳糖定量曲線
R=0.99903
本次實(shí)驗(yàn)的難點(diǎn)是樣品沒有紫外吸收,樣品水溶性強(qiáng),需用乙腈稀釋,半乳糖和葡萄糖不易達(dá)到基線分離。且ELSD3300運(yùn)行參數(shù)如氣體流速和檢測(cè)溫度以及增益值必須優(yōu)化。
本方法使用ELSD3300測(cè)定了牛乳中半乳糖的含量,半乳糖和葡萄糖實(shí)現(xiàn)了基線分離,ELSD3300有平衡時(shí)間短,基線噪音小,重現(xiàn)性高和線性好等特點(diǎn)。
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